Antibody–Oligonucleotide

All-in-One™ Conjugation Kit

CAT. NO.

SIZE

A-9202-001

1 Kit

 Description

특허받은 SoluLINK® bioconjugation technology를 이용한 Antibody-Oligonucleotide All-in-One Conjugation Kit는 항체를 올리고뉴클레오티드에 연결합니다.

S-4FB-modified 올리고뉴클레오티드 및 S-HyNic-modified 항체는 항체-올리고뉴클레오티드 conjugate를 형성합니다. 이 키트는 20-80 base의 모든 amino-modified 올리고뉴클레오티드에 100µg의 항체를 결합하도록 특별히 설계되었습니다.

 Key Features:

• 모든 포유류 단클론 또는 다클론 IgG isotype 항체를 총 4시간 정도의 작업 시간만으로 올리고뉴클레오티드에 결합하고 정제할 수 있습니다.
• SoluLINK bioconjugation technology는 몰흡광계수(molar extinction coefficient)가 29,000 L mol-1 cm-1이며 354 nm로 측정 가능하고 안정적인 UV-traceable bis-aryl hydrazone 결합을 형성합니다.
• 결합반응은 chromophoric conjugate 결합을 형성하므로 분광학적 정량이 가능합니다.

 Specifications

 Conjugation Targets

Antibody

 Label/Modifier Type

Oligonucleotide

 Reactivity 

Amine

 Recommended Storage

4°C

 Applications

Antibody Labeling, Antisense/RNAi, Aptamers, Immunotherapeutics, In Situ Proximity Ligation, In vitro Diagnostic (IVD), Laboratory Developed Tests (LDT), Analyte Specific Reagents (ASR)

 Kit Components

▶ S-HyNic (100 μg)
▶ Oligo Resuspension Solution (250 μL)
▶ 1X Modification Buffer (500 μL)
▶ Bead Wash Buffer (5 mL)
▶ Bead Elution Buffer (0.25 mL)
▶ Red Cap Spin Column (2 columns)
▶ Yellow Cap Spin Column (1 column)

▶ Blue Cap Spin Column (2 columns)
▶ Anhydrous DMF (1.0 mL)
▶ 2-HP Reagent (500 μL)
▶ Affinity Magnetic Beads (75 μL)
▶ 2 mL Collection Tubes (14)
▶ S-4FB (1.0 mg)
▶ Brown Cap Spin Column (2 columns) 

 Documents

A-9202 Product Insert
A-9202 Conjugation Calculator
A-9202 Product Manual

 Select Publications:

1. Lee, J. Accelerated super-resolution imaging with FRET-PAINT. Molecular Brain 10: 63 (2017)
   (https://molecularbrain.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13041-017-0344-5)
2. Hu, J. et al. A Reusable Electrochemical Proximity Assay for Highly Selective, Real-Time Protein Quantitation in Biological Matrices. Am. Chem. Soc. 2014, 136, 23, 8467-8474 (https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja503679q)
3. Mikita, K. et al. Quantification of Plasmodium falciparum Histidine-Rich Protein-2 in Cerebrospinal Spinal Fluid from Cerebral Malaria Patients. Am. J. Trop. Med. Hyg., 91(3), 2014, pp. 486–492 (https://www.ajtmh.org/content/journals/10.4269/ajtmh.14-0210)

 Technical Information

1) Conjugation Chemistry

프로세스의 첫 번째 단계는 3’ 또는 5’-amino-modified 올리고뉴클레오티드를 S-4FB (Succinimidyl-4-formylbenzamide)로 라벨링하는 것으로 시작됩니다. 이 amine-reactive NHS ester는 원하는 올리고뉴클레오티드 말단에 방향족 aldehyde 작용기인 formylbenzamide (4FB)를 통합합니다.

Figure 1. HyNic-modified IgG와 4FB-modified 올리고의 반응이 안정적인 항체-올리고뉴클레오티드 conjugate의 빠른 형성을 유도

프로세스의 2단계에서는 상보적 linker인 S-HyNic (succinimidyl-6-hydrazino-nicotinamide)를 사용해 다클론 또는 단클론 항체 (100μg)를 변형합니다. 이 NHS-ester는 라이신 잔기와 반응하여 HyNic 작용기 (hydrazinonicotinamide)를 항체에 통합합니다. 3단계와 최종단계에서는 두 개의 변형된 생체분자가 반응촉매 (aniline)가 있는 상태에서 함께 혼합되어 conjugate를 형성하며, 그 후 magnetic affinity solid phase를 이용하여 정제가 이루어집니다.

2) Conjugate Purification
All-in-One Conjugation Kit로 생성된 항체-올리고뉴클레오티드 conjugate는 가장 까다롭고 민감한 응용분야에 사용될 수 있습니다. 이 키트는 잔여 항체나 올리고뉴클레오티드가 사실상 없는 고순도 conjugate를 제공합니다 (>98%). 반응 조건은 항체의 거의 100%를 conjugate로 변환하도록 최적화되어 있으며, 과잉 4FB-oligo만 제거됩니다. 항체를 conjugate로 완전히 변환하면 Figure 2와 같이 정제 과정이 단순해집니다. 항체-올리고뉴클레오티드 conjugate는 magnetic affinity matrix에 선택적으로 결합하여 거의 균질하게 정제됨으로써 과잉 4FB-oligo도 씻어낼 수 있습니다. 그후 conjugate는 매트릭스 및 버퍼에서 부드럽게 용출되고 장기 저장용 버퍼로 교환됩니다. 이 키트로 생성되는 항체-올리고뉴클레오티드 conjugate는 저장 버퍼에서 4°C로 보관 시 최대 1년간 안정적입니다.

Figure 2. All-in-One conjugate 정제 전략

 
All-in-One Conjugation Overview