A. Product Description ChromaLINK Biotin One-Shot Antibody Labeling Kit는 항체 100 mg을 약 2시간 내에 바이오티닐화하도록 설계되었습니다. 키트는 항체를 라벨링하기위해 ChromaLINK Biotin이라는 UV-traceable linker를 사용합니다 (Figure 1). 이 고유한 라벨링 시약 (특허출원중)은 약한 인산염 완충 조건에서 항체의 라이신 잔기를 효율적으로 변형하는 방향성이며 수용성인 N-hydroxy-succinimidyl ester 작용기 (a)를 함유하고 있습니다. 또한 내장된 bis-aryl hydrazone 구조 (b)가 linker의 UV-traceable chromophore를 형성합니다. Chromophore에 의해 제공되는 흡광도 특성은 통합된 바이오틴 (c)의 신속하고 비파괴적인 정량화를 가능하게 합니다. 또한 linker에는 long PEG3 spacer (d)가 있어 스트렙트아비딘/바이오틴 친화력을 보존하고 항체 용해성을 유지하는데 도움이 됩니다. 
Figure 1. ChromaLINK Biotin (C38H50N8O10S; MW 810.92)의 구조 B. Features and Benefits
ChromaLINK Biotin One-Shot Kit는 즉시 검증 가능한 양의 바이오틴을 100 μg의 항체에 통합하는 간편하고 효율적인 방법입니다. 키트에는 항체 용액에 쉽게 재부유되는 ChromaLINK Biotin 시약이 포함되어 있습니다. ChromaLINK Biotin은 포유류 IgG (단클론 또는 다클론) 및 조류 IgY를 포함한 다양한 항체에 라벨을 붙이는 데 사용될 수 있습니다. 바이오틴 통합은 과잉 라벨링 시약을 제거한 후 간단한 비파괴 UV-스캔 (220~400nm)을 통해 신속하게 결정됩니다. 항체 회수율 (60–90 μg)이 높고 바이오틴 결합 수준 (항체 분자당 3–8 바이오틴 분자)이 일정하게 유지됩니다. C. ChromaLINK One-Shot Process Diagram
ChromaLINK Biotin One-Shot 항체 라벨링 절차는 Figure 2와 같습니다. 
Figure 2. ChromaLINK Biotin One-Shot 항체 라벨링 과정
D. Process Summary 1. 샘플 준비 : 100 μL 버퍼에 항체를 1 mg/mL로 준비
2. 1차 샘플 분석 : Spectrophotometer를 이용하여 항체 농도 확인
3. 1차 버퍼 교환 : Spin column과 버퍼 교환 항체를 안정화 (equilibration)
4. 2차 샘플 분석 : Spectrophotometer를 이용하여 항체 농도 재확인
5. 바이오티닐화 : 항체를 ChromaLINK Biotin으로 라벨링
6. 2차 버퍼 교환 : 과잉 라벨링 시약 제거
7. 바이오틴 통합 정량화 : Spectrophotometer를 이용하여 바이오틴 통합 측정 E. Important Labeling Parameters ChromaLINK Biotin One-Shot Antibody Labeling Kit는 Table 1과 같이 100 μL 버퍼에 재부유된 100 μg의 항체를 바이오티닐화하도록 설계되었습니다. Initial Antibody Concentration | Initial Mass of Antibody | Initial Antibody Volume | 1.0±0.1 mg/ml | 100±10 ug | 100±5 ul | Table 1. ChromaLINK Biotin One-Shot 라벨링 과정에 요구되는 초기 조건
이 키트는 다음과 같은 반응 변수를 제어하여 일관되고 신뢰할 수 있는 수준의 바이오티닐화를 제공합니다:
● 고정된 항체 질량 (100 μg) 및 부피 (100 μL)
● 최적화된 반응 버퍼
● 제어되고 고정된 반응 시간 (90분)
● 일관된 반응 화학양론 (12X mole-equivalents) (12-fold molar excess of biotin reagent) 일관된 바이오틴 통합에 중요한 것은 귀중한 샘플의 전체 또는 거의 완전한 회수가 가능하도록 비파괴적인 방법으로 항체의 초기 단백질 농도를 정확하게 판단할 수 있는 사용자의 능력입니다. 키트는 기존 A280이 아닌 스캔 (220~400nm)을 사용해 항체 농도를 추정할 것을 권장합니다. 단일 파장 (A280)이 아닌 스캔을 사용하는 이유는 많은 상업용 항체가 샘플의 본질적인 A280을 가리거나 왜곡하는 방부제 또는 기타 첨가제를 함유하고 있기 때문입니다. 첨가제의 존재는 A280을 통해 단백질 농도를 정확하게 추정하는 것을 더 어렵게 하거나 때로는 불가능하게 만들 수 있습니다. 그러나 스캔은 더 큰 스펙트럼 정보를 포함하며, 종종 단백질 농도의 정확한 추정에 방해가 되는 것으로 알려진 스펙트럼 변경 첨가제의 존재를 드러냅니다. 변경된 스펙트럼은 샘플의 A280이 단백질 농도의 정확한 추정치를 산출하지 못할 것이라는 경고입니다. 일반적으로 사용되는 첨가제는 sodium azide, thimerosal, BSA 또는 젤라틴과 같은 단백질 안정제, glycine이나 trehalose와 같은 작은 분자 첨가제를 포함합니다. | 
