A. Product Description Fluorescein One-Shot Antibody Labeling Kit는 항체당 3~5개의 fluorescein 분자를 라벨링 할 수 있게 설계되었습니다. 키트에는 두번의 라벨링 반응 (반응당 100μg의 항체)을 수행하기에 충분한 시약이 들어 있습니다. Fluorescein이 라벨링된 항체는 세포나 조직의 표준 면역형광 염색에 사용될 수 있습니다. 이 키트에는 약 90분 안에 항체에 라벨을 붙이고 정제하는 데 필요한 모든 성분이 들어 있습니다. B. Features and Benefits
Fluorescein One-Shot Antibody Labeling Kit는 5- and 6-carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimidyl ester (Figure 1)의 이성질체 혼합물을 사용하여 항체 라이신 잔기를 변형합니다. 반응 조건은 일관된 수준의 형광 결합과 최대의 면역 형광 시그널 출력을 제공하도록 최적화되었습니다. 키트에는 라벨링 및 통합된 fluorescein 분자의 정량화를 위한 단계별 지침이 포함되어 있습니다. 사용자가 복잡한 계산을 수행할 필요 없이 항체 농도와 형광 결합 수준을 자동으로 결정하는 Fluorescein Protein MSR Calculator도 제공됩니다. 이 키트는 mouse, rat, rabbit, goat, sheep, horse, cow, hamster, 또는 human IgG를 포함한 모든 종류의 포유류 항체에 fluorescein을 부착하는 데 사용될 수 있습니다. 
Figure 1. 5-(and 6-) carboxyfluorescein succinimidyl ester의 구조 C. Fluorescein Procedure Diagram
ChromaLINK Digoxigenin One-Shot Antibody Labeling Kit의 항체 라벨링 절차는 Figure 2와 같습니다. 
Figure 2. Fluorescein 라벨링 과정 요약
D. Process Summary 1. 샘플 준비 : 100 μL 버퍼에 항체를 1 mg/mL로 준비
2. 샘플 분석 : Spectrophotometer를 이용하여 항체 농도 확인
3. 1차 버퍼 교환 : Spin column과 버퍼 교환 항체를 안정화 (equilibration)
4. 항체 라벨링 : NHS-Fluorescein을 사용하여 항체 라벨링
5. 2차 버퍼 교환 : 과잉 라벨링 시약 제거
6. Fluorescein 통합 정량화 : A280/A494 측정 및 제공된 Fluorescein Protein MSR Calculator 사용 E. Important Labeling Parameters 키트는 100 mg의 항체에 fluorescein을 추가하도록 특별히 설계되었습니다. 이 키트는 다음과 같은 반응 변수를 제어하여 일관되고 신뢰할 수 있는 fluorescein 통합을 제공합니다:
● 최초 항체 질량 (100 μg) 및 부피 (100 μl)
● 반응 버퍼 이온성분 및 pH
● 반응 시간 (60분)
● 반응 화학양론 라벨링의 일관성에 중요한 요소는 최초 항체 농도의 정확한 확인입니다. 이 절차에서는 항체 농도를 측정하기 위해 280nm의 단일 파장 스캔 대신 스펙트럼 스캔 (220~350nm)을 사용할 것을 권장합니다. 스펙트럼 스캔은 샘플의 A280을 변화시킬 수 있는 간섭 첨가제 또는 방부제의 존재를 드러내는 추가 정보를 제공합니다. 상업적으로 획득한 항체 준비물에 존재하는 일반적인 첨가물로는 sodium azide, thimerosal, BSA 또는 젤라틴과 같은 단백질 안정제, glycine이나 trehalose와 같은 작은 분자 첨가제가 있습니다. 상업용 항체 공급원에 이러한 첨가제가 포함되어 있는 경우 부록의 문제 해결 가이드 섹션을 참조하여 진행 방법을 결정합니다. | 
