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Ea AgriStrip : 과수화상병 (Fire Blight, Erwinia amylovora) 신속 진단 키트 2020/06/23 (09:35) 조회(1317) 관리자

 

 

 

  

 


과수화상병 (Fire Blight) 진단 및 Erwinia amylovora (Ea) 검출을 위한 신속 진단 키트

 

 

 목적

 

 

 

 

 

Erwinia amylovora 검출을 위한 신속 진단 키트인 Ea AgriStripBIOREBA에 의해 생산되었으며 농업 및 식품 분야의 연구를 위한 스위스의 우수 센터인 Agroscope와 협력하여 검증되었습니다. 이 프로젝트는 스위스 정부의 혁신 진흥원 (CTI)의 지원을 받았습니다.


신속 검사를 통해 인과류 또는 관련 관상용 및 야생 식물에서 과수화상병 병원체의 존재를 현장에서 몇 분 이내에 확인할 수 있습니다. 샘플은 건강한 조직과 증상이 있는 조직 사이의 전이 구역에서 채취하며 이 부분이  가장 높은 농도의 박테리아를 함유하고 있습니다. (그림 2a). 활성 줄기마름병 및 박테리아 누출도 테스트에 적합합니다 (그림 2b).
그러나 무증상 꽃, 비활성 줄기마름병 및 뿌리는 낮은 박테리아 농도로 인해 신뢰할 수 있는 결과를 제공하지 않을 수 있습니다.


인간에게는 무해하지만 이 박테리아는 다른 숙주식물에 대한 감염 위험이 높기 때문에 검역 유기체로 간주됩니다. 이 치명적인 질병의 확산을 막기 위해 샘플링 후 적절한 위생/처분이 중요하며, 현지 식물 위생 규정을 따라야합니다.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 특이도/민감도

 

 

 

 

 

이 신속 진단에 사용 된 특정 항체는 유럽과 미국의 서로 다른 Erwinia amylovora의 혼합물에 대해 생성되었으며 과수화상병 병원체와 만 반응합니다. 검출 한계는 5 x 105 내지 106 cfu/ml 입니다. 아시아에서만 발견되는 관련 화상병 병원체 (Erwinia pyrifoliae)에서도 양성 반응이 일어납니다. 이와는 대조적으로, Phyomonas sp, Pantoea aguplants 또는 인과류 샘플에서 흔히 발견되는 다른 박테리아와 교차반응은 관찰되지 않았습니다.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 특징

 

 

 

 

 

  • 특정 항체를 사용하는 측방 유동 면역 크로마토그래피 (Lateral flow immunochromatography) 기반 키트
  • 샘플 추출물에 스트립을 담그면 추출물이 위쪽으로 이동하여 항원-항체 반응을 일으키면서 가시적인 라인(line) 생성
  • 양성 샘플은 테스트 라인과 컨트롤 라인이 모두 나타나지만, 음성 샘플은 상단의 컨트롤 라인만 나타남
  • 라인은 1~2분 후 나타나기 시작하여 10~15분 후 최대 강도에 도달
  • 다양한 옵션

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 분석방법

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

증상이 있는 목재 샘플링
나무 껍질 층을 제거하고 건강한 형성층 조직과 증상이 있는 형성층 조직 사이의 전이 구역에서 날카 롭고 소독 된 나이프로 약 1mm 두께의 작은 세로 조각으로 긁어냅니다 (그림 2a). 먼저 추출 백에 일회용 피펫으로 추출 버퍼 4ml를 옮긴 다음 약 0.2 – 0.5g (5-10개)의 샘플을 넣습니다 (그림 3._Fig. 1). 평평한 표면에서 Homogenizer 또는 고무 망치등을 사용해 조직을 완전히 으깨어 압출된 식물 수액이 추출 버퍼와 완전히 혼합되도록 합니다(그림 3_Fig. 2). 그런 다음 추출물 4방울 (약 150μl)을 일회용 피펫이 있는 큐벳에 옮겨 담습니다(그림 3_Fig. 3).

 

박테리아 누출 샘플링
먼저 큐벳에 4 방울의 추출 버퍼를 추가하십시오. 그런 다음 일회용 피펫의 끝으로 소량의 박테리아 누출물 (그림 2b)을 취하여 큐벳의 추출 버퍼에 현탁시킵니다. 버퍼가 약간 탁해지면 충분하며 필요한 것보다 더 많은 양을 채취하지 마십시오. 과도한 박테리아 현탁액 (불투명한 용액)은 시험 성능을 방해 할 수 있습니다.

 

테스트
스트립의 «sample»이라고 표시된 끝 부분을 추출물에 넣으십시오(그림 3_Fig. 4). 15분 후에 생성된 라인의 색상을 관찰합니다. 샘플 마크 위쪽이 식물 추출물을 젖지 않도록 하십시오. 

 

그림 2. 샘플링


 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

그림 3. 검사 과정

 

 

Step 1. 식물 샘플의 일부를 추출 백에 넣고

일회용 피펫으로 추출 버퍼 추가


Step 2. 평평한 표면에 놓고 균질기 (homogenizer)로

샘플 균질화

 

 

 

 

 

Step 3. 약 4 방울 (약 150 μl)의 추출물을

일회용 큐벳으로 옮김


Step 4. 스트립을 추출물에 삽입하고

라인 형성 관찰

 

 

 

 

 결과 분석

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

  1. 많은 수의 박테리아(>107 cfu/ml)를 함유한 추출물의 경우 그림.1과 같이 강한 테스트 및 컨트롤 라인이 나타납니다. 이는 테스트가 양성이라는 것을 의미합니다.
  2. 적은 수의 박테리아(5x105~10cfu/ml)를 함유한 추출물의 경우 컨트롤 라인보다 약한 테스트 라인이 나타납니다. 이것도 테스트가 양성이라는 것을 의미합니다
  3. 15분 후 컨트롤 라인이 나타나지 않을 경우 음성으로 판정합니다. 이것은 박테리아가 추출물에 존재하지 않거나 검출 한계 이하의 숫자로 존재한다는 것을 의미합니다.
  4. 테스트 및 컨트롤 라인이 모두 나타나지 않을 경우 테스트를 무효로 하며 새로운 스트립으로 반복해야합니다.
  5. 드물게 15~30분 후 희미한 테스트 라인이 보일 수 있습니다. 이 경우 새 추출물로 시험을 반복하거나 다른 방법으로 확인하기 위해 실험실로 샘플을 보내십시오.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 Ea AgriStrip

 

 Optional products

 

 

 Description

Art. No.

Assays

 

 Description

Art. No.

Size

 

 

 Ea AgriStrip Complete kit 25

153081

25

 

 Cuvette rack, holds 12 cuvettes

2166

 1

 

 

 Ea AgriStrip Set 25

153082

25

 

 Cuvettes, disposable

2534

 100

 

 

 Ea AgriStrip Set 100

153083

100

 

 Pipettes, disposable

2292

 500

 

 

 

 

 

 

 Extraction bags Universal

430100

 100

 

 

 

 

 

 

 Homogenizer hand model

400010

 1

 

 

 

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