| 목적 | |
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| Erwinia amylovora 검출을 위한 신속 진단 키트인 Ea AgriStrip은 BIOREBA에 의해 생산되었으며 농업 및 식품 분야의 연구를 위한 스위스의 우수 센터인 Agroscope와 협력하여 검증되었습니다. 이 프로젝트는 스위스 정부의 혁신 진흥원 (CTI)의 지원을 받았습니다.
신속 검사를 통해 인과류 또는 관련 관상용 및 야생 식물에서 과수화상병 병원체의 존재를 현장에서 몇 분 이내에 확인할 수 있습니다. 샘플은 건강한 조직과 증상이 있는 조직 사이의 전이 구역에서 채취하며 이 부분이 가장 높은 농도의 박테리아를 함유하고 있습니다. (그림 2a). 활성 줄기마름병 및 박테리아 누출도 테스트에 적합합니다 (그림 2b).
그러나 무증상 꽃, 비활성 줄기마름병 및 뿌리는 낮은 박테리아 농도로 인해 신뢰할 수 있는 결과를 제공하지 않을 수 있습니다.
인간에게는 무해하지만 이 박테리아는 다른 숙주식물에 대한 감염 위험이 높기 때문에 검역 유기체로 간주됩니다. 이 치명적인 질병의 확산을 막기 위해 샘플링 후 적절한 위생/처분이 중요하며, 현지 식물 위생 규정을 따라야합니다.
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| 특이도/민감도 | |
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| 이 신속 진단에 사용 된 특정 항체는 유럽과 미국의 서로 다른 Erwinia amylovora의 혼합물에 대해 생성되었으며 과수화상병 병원체와 만 반응합니다. 검출 한계는 5 x 105 내지 106 cfu/ml 입니다. 아시아에서만 발견되는 관련 화상병 병원체 (Erwinia pyrifoliae)에서도 양성 반응이 일어납니다. 이와는 대조적으로, Phyomonas sp, Pantoea aguplants 또는 인과류 샘플에서 흔히 발견되는 다른 박테리아와 교차반응은 관찰되지 않았습니다. | |
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| 특징 | |
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| 특정 항체를 사용하는 측방 유동 면역 크로마토그래피 (Lateral flow immunochromatography) 기반 키트 샘플 추출물에 스트립을 담그면 추출물이 위쪽으로 이동하여 항원-항체 반응을 일으키면서 가시적인 라인(line) 생성 양성 샘플은 테스트 라인과 컨트롤 라인이 모두 나타나지만, 음성 샘플은 상단의 컨트롤 라인만 나타남 라인은 1~2분 후 나타나기 시작하여 10~15분 후 최대 강도에 도달 다양한 옵션
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| 분석방법 | |
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| 증상이 있는 목재 샘플링
나무 껍질 층을 제거하고 건강한 형성층 조직과 증상이 있는 형성층 조직 사이의 전이 구역에서 날카 롭고 소독 된 나이프로 약 1mm 두께의 작은 세로 조각으로 긁어냅니다 (그림 2a). 먼저 추출 백에 일회용 피펫으로 추출 버퍼 4ml를 옮긴 다음 약 0.2 – 0.5g (5-10개)의 샘플을 넣습니다 (그림 3._Fig. 1). 평평한 표면에서 Homogenizer 또는 고무 망치등을 사용해 조직을 완전히 으깨어 압출된 식물 수액이 추출 버퍼와 완전히 혼합되도록 합니다(그림 3_Fig. 2). 그런 다음 추출물 4방울 (약 150μl)을 일회용 피펫이 있는 큐벳에 옮겨 담습니다(그림 3_Fig. 3). 박테리아 누출 샘플링
먼저 큐벳에 4 방울의 추출 버퍼를 추가하십시오. 그런 다음 일회용 피펫의 끝으로 소량의 박테리아 누출물 (그림 2b)을 취하여 큐벳의 추출 버퍼에 현탁시킵니다. 버퍼가 약간 탁해지면 충분하며 필요한 것보다 더 많은 양을 채취하지 마십시오. 과도한 박테리아 현탁액 (불투명한 용액)은 시험 성능을 방해 할 수 있습니다. 테스트
스트립의 «sample»이라고 표시된 끝 부분을 추출물에 넣으십시오(그림 3_Fig. 4). 15분 후에 생성된 라인의 색상을 관찰합니다. 샘플 마크 위쪽이 식물 추출물을 젖지 않도록 하십시오. | | 그림 2. 샘플링
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| 그림 3. 검사 과정
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Step 1. 식물 샘플의 일부를 추출 백에 넣고 일회용 피펫으로 추출 버퍼 추가 |
| Step 2. 평평한 표면에 놓고 균질기 (homogenizer)로 샘플 균질화 |
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Step 3. 약 4 방울 (약 150 μl)의 추출물을 일회용 큐벳으로 옮김 |
| Step 4. 스트립을 추출물에 삽입하고 라인 형성 관찰 |
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| 결과 분석 | |
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| - 많은 수의 박테리아(>107 cfu/ml)를 함유한 추출물의 경우 그림.1과 같이 강한 테스트 및 컨트롤 라인이 나타납니다. 이는 테스트가 양성이라는 것을 의미합니다.
- 적은 수의 박테리아(5x105~106 cfu/ml)를 함유한 추출물의 경우 컨트롤 라인보다 약한 테스트 라인이 나타납니다. 이것도 테스트가 양성이라는 것을 의미합니다
- 15분 후 컨트롤 라인이 나타나지 않을 경우 음성으로 판정합니다. 이것은 박테리아가 추출물에 존재하지 않거나 검출 한계 이하의 숫자로 존재한다는 것을 의미합니다.
- 테스트 및 컨트롤 라인이 모두 나타나지 않을 경우 테스트를 무효로 하며 새로운 스트립으로 반복해야합니다.
- 드물게 15~30분 후 희미한 테스트 라인이 보일 수 있습니다. 이 경우 새 추출물로 시험을 반복하거나 다른 방법으로 확인하기 위해 실험실로 샘플을 보내십시오.
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| Ea AgriStrip | | Optional products | |
| Description | Art. No. | Assays | | Description | Art. No. | Size | |
| Ea AgriStrip Complete kit 25 | 153081 | 25 | | Cuvette rack, holds 12 cuvettes | 2166 | 1 | |
| Ea AgriStrip Set 25 | 153082 | 25 | | Cuvettes, disposable | 2534 | 100 | |
| Ea AgriStrip Set 100 | 153083 | 100 | | Pipettes, disposable | 2292 | 500 | |
| | | | | Extraction bags Universal | 430100 | 100 | |
| | | | | Homogenizer hand model | 400010 | 1 | |
