Introduction to SoluLINK Bioconjugation Technology SoluLINK의 핵심 기술은 방향족 hydrazine과 방향족 aldehyde로부터 형성된 안정된 결합을 기반으로합니다. S-HyNic 1 (succinimidyl 6-hydrazinonicotinate acetone hydrazone, SANH)은 생체분자에 방향족 hydrazine linker를 통합하는 데 사용됩니다. S-HyNic은 생체분자 및 표면의 아미노기를 HyNic기로 직접 전환하는 아미노 반응성 시약입니다. S-4FB 2 (succinimidyl 4- formylbenzoate, SFB)는 아미노 기를 방향족 aldehydes (4-formylbenzamide (4FB) groups)로 전환하는 데 사용됩니다. HyNic-modified 생체분자를 4FB-modified 생체분자 또는 표면에 추가하면 conjugate가 형성됩니다 (Figure 1). Conjugate 결합은 92°C의 온도와 pH 2.0-10.0에도 안정적입니다. 항체 접합에 권장되는 pH는 6.0입니다. Disulfide bond를 분해해 단백질의 활성을 저해할 수 있는 환원 시약이 필요한 thiol 기반 결합 프로토콜과 달리 HyNic-4FB 결합 커플은 disulfide bond를 그대로 둡니다. 금속, 산화제 또는 환원제가 필요하지 않습니다. 
Figure 1. 항체는 S-HyNic으로 변형되어 HyNic 그룹을 통합하고 두 번째 단백질은 S-4FB로 변형되어 4FB 그룹을 통합하는 SoluLINK Bioconjugation chemistry. Conjugate는 HyNic 변형 항체와 4FB 변형 단백질을 간단히 혼합하여 직접 형성됩니다. HyNic/4FB 커플의 많은 장점을 더욱 돋보이게 하는 것은 aniline이 Schiff’s base의 형성을 촉진한다는 것을 밝힌 Dirksen et al.의 발견입니다. 이것은 특히 큰 생체분자 결합에 효과적입니다. 항체-단백질 결합의 경우, 반응 혼합물에 10 mM aniline을 첨가하면 1-2 몰당량의 두 번째 단백질을 사용하여 약 2시간 이내에 항체의 95% 이상이 conjugate로 변환됩니다. HyNic-4FB conjugate 결합은 chromophoric으로 354 nm에서 흡수되며 29,000의 molar extinction coefficient을 갖습니다. 이를 통해 (1) 결합 반응의 실시간 분광학적 모니터링, (2) UV 또는 photodiode array detector를 사용한 크로마토그래피 정제 중 결합을 '시각화' (3) 결합의 정량화가 가능합니다. | 
